產品詳情
貨號：SLM M08011 外觀：淡紅色粉末
儲存：2℃-8℃密封保存 保質期:24個月
一.產品說明
貼壁細胞低血清培養(yǎng)基M08011（以下簡稱M08011)為成分明確培養(yǎng)基，不含任何動物來源組分，適用于多種貼壁細胞低血清培養(yǎng)和細胞維持。與常規(guī)培養(yǎng)基相比，M08011血清使用濃度為3-5%。從8-10%血清濃度，適應到3-5%血清濃度一般需要4-5代，每代培養(yǎng)時間為48-72小時。使用低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞形態(tài)略有不同，屬于正?，F(xiàn)象。
二.配制方法
1.將培養(yǎng)基粉末加入配置容器。
2.量取適量細胞培養(yǎng)用水于配制容器，攪拌15-20分鐘，使其完全溶解。
3.將 NaHCO3 以2.44g/L的量加入培養(yǎng)液中，攪拌2-3分鐘，使其完全溶解。
4.使用 1M NaOH 或 1M HCl調節(jié)培養(yǎng)液至所需 pH，定容。
5.使用 0.22μm 孔徑濾膜或濾芯正壓過濾，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
三.使用M08011培養(yǎng)貼壁細胞的適應方法
1.貼壁細胞培養(yǎng)通常使用公開配方的 MEM 或者 DMEM 進行培養(yǎng)，使用血清濃度通常為8%-10%。如需要替換成M08011進行培養(yǎng)，需要逐步降低血清用量。
2.不同來源的貼壁細胞株培養(yǎng)特性各有不同，馴化和適應所需代次也有差異，最終使用的血清濃度也有不同。根據(jù)我們整理的信息，不同來源的貼壁細胞株基本上都能適應4-5%血清濃度。
3.更低血清濃度的適應也是可以成功的，但是由于個性化的培養(yǎng)基配方對細胞株有篩選作用，最終可能對細胞株的病毒敏感性和病毒產量有較大影響。為了使細胞株能一次性適應成功，降低病毒抗原的生產成本，我們推薦客戶優(yōu)先使用4-5%的血清濃度進行培養(yǎng)。
4.現(xiàn)介紹一種梯度降低血清的適應方法：
準備倍增正常、無外源污染的貼壁細胞株，使用常規(guī) MEM 或者 DMEM 進行培養(yǎng)，血清濃度為8-10%。
將細胞培養(yǎng)液完全替換為M08011，碳酸氫鈉添加量為2.44g/升，使用血清濃度為6%，以原有 MEM 或者 DMEM 培養(yǎng)的接種密度進行接種，連續(xù)培養(yǎng)直至細胞倍增正常。
然后可以降低血清使用濃度至4%-5%，以原有 MEM 或者 DMEM 培養(yǎng)的接種密度進行接種，連續(xù)培養(yǎng)直至細胞倍增正常。
使用適應好的貼壁細胞株進行病毒抗原生產，如病毒滴度不理想，可以將收獲的第一代病毒液進行續(xù)傳，續(xù)傳三代以后，一般情況下，病毒毒價會恢復至正常水平。
將適應好的貼壁細胞株保種，下次復蘇該細胞時，可以直接使用4%-5%血清濃度的M08011進行培養(yǎng)。
四.部分客戶應用情況
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細胞株 |
生長液 |
維持液 |
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Marc145 |
M08011 + 3%NBS |
MEM + 1-2%NBS |
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Vero |
M08011 + 3%NBS |
MEM + 0-1%NBS |
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ST |
M08011 + 3%NBS |
M08011 + 0-0.5%NBS |
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PK15 |
M08011 + 3-4%NBS |
M08011 + 0.5%NBS |
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MRC-5 |
M08011 + 5%FBS |
M08011 + 0.5%FBS |
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F81 |
M08011 + 3%NBS |
M08011 + 1-2%NBS |
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山羊腎細胞 |
M08011 + 4%NBS |
MEM + 1-2%NBS |
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