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動物細(xì)胞培養(yǎng)消化液
發(fā)布時間：
2015-10-30
對于貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)過程中細(xì)胞是貼壁生長的，傳代時需要使細(xì)胞從瓶壁上脫落下來，并分散成單個細(xì)胞。細(xì)胞外含有多種胞外蛋白，如膠原蛋白；使細(xì)胞間或細(xì)胞與培養(yǎng)瓶內(nèi)壁粘連起來。用胰蛋白酶分解這些蛋白質(zhì)后就可以使它們分開了。胰蛋白酶有消化作用，胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細(xì)胞間的膠原纖維和細(xì)胞外的其他成分酶解，獲得單個細(xì)胞。胰蛋白酶和膠原蛋白酶都可以使用，因為這兩種蛋白酶的pH活性比較適中。
1、胰蛋白酶
胰蛋白酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織，如胚胎、上皮、肝、腎等組織。對傳代培養(yǎng)細(xì)胞效果也很好。但對于纖維性組織和較硬的癌組織的效果差。胰蛋白酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰蛋白酶的濃度、組織塊的大小和硬度有關(guān)。胰蛋白酶濃度一般為0.1％-0.5％，常用0.25％。pH值以8-9較好，一般使用pH7.2，這樣消化后殘留的胰蛋白酶溶液不會對培養(yǎng)液的pH值帶來明顯的變化。溫度以37℃******，但在夏季室溫25℃以上對一般傳代細(xì)胞也能達(dá)到消化效果。4℃時胰蛋白酶仍有緩慢的消化作用。消化時間要根據(jù)不同情況而定，溫度低、組織塊大、胰蛋白酶濃度低者，消化時間長，反之則相應(yīng)減少時間。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。終止消化時，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細(xì)胞的作用。
2、膠原酶
膠原酶對膠原的消化作用很強，它僅對細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對上皮細(xì)胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。鈣、鎂離子和血清成份不會影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS或含血清的培養(yǎng)液配制。
3、胰酶-EDTA
細(xì)胞之間是通過CAM（細(xì)胞粘性分子）相連的，而很多粘性分子只有在有+2價金屬離子，如Ca2+，Mg2+，的存在下才能行使這種功能。在胰酶中加EDTA，EDTA對鈣鎂離子有很好的螯合作用，可使細(xì)胞被更好的消化。胰蛋白酶-EDTA溶液的常用濃度胰蛋白酶為0.25%，EDTA為0.02%。
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